Tema: Un enfoque CRISPR / Cas9 optimizado para la edición rápida del genoma en Toxoplasma gondii

Tipo de edición: in vitro

Dirigido hacia: ADN diana en el genoma

Dirigido por:  El complejo de ribonucleótidos sgRNA: Cas9 se guía al sitio PAM 

Órgano a tratar: Cerebro

Vía de administración: Mutagénesis química

Resultados:

Corto: Diseñar más de un crRNA si los primeros ensayos no tienen éxito.

Mediano: Un exceso de sales presentes en la reacción de transfección podría causar la formación de arcos y reducir la viabilidad de los parásitos y la eficiencia de la transfección.

Largo: Para monitorear las eficiencias en los parásitos, el experimento debe repetirse tres veces; resultados de eficiencia similares indican un resultado correcto.

Referencias Bibliográficas:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7865079/

 

Tipo de Stem Cell: Células madre hematopoyéticas (alo-TCMH)

Método de obtención: Analizamos los receptores de alo-TCMH seropositivos a Toxoplasma durante un período de 4 años. El estado serológico anti - Toxoplasma (IgM e IgG anti- Toxoplasma Platelia, BioRad) se evaluó en los donantes y receptores antes del aloinjerto. Recopilamos información del aloinjerto y el uso de profilaxis anti- Toxoplasma en los días +30, +90 y +180 postrasplante. Además, recuperamos características clínicas, radiológicas y parasitológicas de todos los casos de Toxoplasma Reactivación.

Vía de administración: El fármaco profiláctico de primera línea fue TMP-SMZ oral en una dosis de 160 a 800 mg tres veces por semana, comenzando el día del alta hospitalaria o el día +30 a más tardar si aún se encuentra hospitalizado.

Resultados: 

Corto: Reducir el riesgo de infección por Toxoplasma después de un alo-TCMH

Mediano:  Se implemento estrategias de tratamiento preventivo y profiláctico para la toxoplasmosis en pacientes de alto riesgo. Los cambios resultantes en la estrategia llevaron a un aumento notable en el uso de TMP-SMZ y tuvieron éxito en limitar el número de eventos de reactivación temprana. 

Largo plazo: Actualmente estamos evaluando la eficacia a largo plazo de esta estrategia de prevención y su seguridad, con especial énfasis en su impacto en los parámetros de reconstitución inmunitaria temprana.

Estos resultados preliminares destacan la necesidad de pautas más precisas con respecto a la prevención de la toxoplasmosis después del alo-TCMH y abogan por la introducción temprana de TMP-SMZ tan pronto como el injerto, al menos en centros con alta incidencia de toxoplasma.-seropositividad o donde se realicen alo-TCMH de alto riesgo.

Referencias Bibliográficas: 

1.- https://www.nature.com/articles/s41409-019-0641-y

Tema: Toxoplasmosis Humana en ratones transgénicos carentes de IFN-γ

Tipo de animal: ratones transgénicos IL-γβ  

Método de obtención: Los ratones fueron sacrificados el octavo día después de la infección para el análisis de la infección aguda y el trigésimo para el análisis de la infección crónica. El tipo salvaje (WT) y IL- γβ TG fueron infectados con 10 quistes de la cepa ME49, por vía oral.

Se ha encontrado que el INF-γ induce a la enzima que degrada al triptófano la indolamina 2,3- dioxigenasa 23, generando una posible carencia de este aminoácido lo que se ha asociado con una probable disminución de la replicación del parásito con la formación del quiste aunque aún no está claro.

Usos: . En este estudio, ratones transgénicos para IL- γβ (IL-γβ TG) fueron utilizado para estudiar el papel de esta citocina en la infección causada por Toxoplasma gondii.

-Actúa sobre la morbilidad de los ratones durante la toxoplasmosis.

-Actuó sobre el parasitismo tisular durante la infección aguda. 

- Hubo diferencia en la inflamación y la producción de anticuerpos

 

Referencias Bibliográficas: 

1. http://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/24657/3/Avalia%c3%a7%c3%a3oFun%c3%a7%c3%a3oInterleucina.pdf

2. https://sites.google.com/site/gruposetnicosdelecuadorep/home/ventajas-y-desventajas-del-uso-de-transgenicos

T: Desarrollo y evaluación de la proteína GRA8 recombinante para el serodiagnóstico de la infección por Toxoplasma gondii en cabras                                                                                                                                                    O: La producción de una proteína recombinante a partir de un gen sintético y la capacidad de detectar la infección por T. gondii en muestras de campo. 

G: gen sintético TgGRA8

ER:  PmlI, HhaI, Sau3AI

EL:T4

V: pET-21a

CR: células competentes de E. coli DH5α

MTG: La proteína recombinante se purificó por afinidad y se caracterizó mediante electroforesis en gel de poliacrilamida-dodecilsulfato de sodio y transferencia Western.

MIC: Las colonias positivas se identificaron mediante PCR de colonias. El análisis de secuencia del clon reveló una homología del 100% con la secuencia de TgGRA8 recombinante.

Ejemplo de ácidos nucleicos en la naturaleza

En los nucleósidos de orígen natural, en enlace N-glicosídico siempre es ß-. Podemos ver como ejemplo la estructura de la adenosina que es el nucleósido correspondiente a la base adenina (esto es, la ß-D-ribofuranosil adenina). los nucleótidos naturales más abundantes son los que tienen fosfato en la posición 5’. Nucleótidos con fosfato en 3’ aparecen en la degradación de los ácidos nucleicos.

Referencias Bibliográficas: 

 1.- https://link.springer.com/article/10.1186/s12917-020-02719-3

2. https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstream/handle/1992/10402/u251122.pdf?sequence=1

3. https://www.colibri.udelar.edu.uy/jspui/bitstream/20.500.12008/26122/1/uy24-19820.pdf

4. http://medicina.usac.edu.gt/quimica/biomol/acids.htm